Oligo DNA的電泳一定要使用變性PAGE電泳。Oligo DNA是單鏈DNA，容易形成復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)，因此進(jìn)行Agarose電泳時(shí)，容易出現(xiàn)多條泳帶 (更無(wú)法用Agarose電泳進(jìn)行定量了)。

A、G、C、T的組份不同，電泳速度不同； DNA的立體結(jié)構(gòu)不同，電泳速度不同。 這種情況在Oligo DNA越短時(shí)越容易發(fā)生，長(zhǎng)鏈Oligo DNA之間差別越小。

沒(méi)有，5' 和3' 末端均為-OH基。如需要加磷酸基團(tuán)，訂貨時(shí)請(qǐng)?zhí)貏e注明，此時(shí)需收取磷酸化 (PO4修飾) 的費(fèi)用。

不能。 因?yàn)镋tBr是通過(guò)嵌入到核酸的雙螺旋間而使其著色的。合成的DNA/RNA分子為單鏈，只有通過(guò)自身回折形成局部發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)或鏈間形成部分雙螺旋結(jié)構(gòu)，才能被EtBr染色。由于不同制品的序列不同，形成雙螺旋的能力不同，因此染色能力不盡相同，也就不能根據(jù)EtBr染色帶的亮度來(lái)對(duì)合成的DNA/RNA進(jìn)行定量。

連接反應(yīng)的引物如果沒(méi)有5’磷酸基團(tuán)，連接效率相對(duì)較低，但不是完全不能成功。 如果磷酸化的產(chǎn)物還不能連接載體上，需要檢查載體的酶切效果以及核對(duì)引物的設(shè)計(jì)方案，如果都沒(méi)有問(wèn)題就要考慮改善引物退火的條件以及連接反應(yīng)體系。

合成DNA的長(zhǎng)度為6～130個(gè)堿基；合成RNA的長(zhǎng)度為8～35個(gè)堿基。當(dāng)合成的DNA序列較長(zhǎng)時(shí)，由于合成及純化方法的限制,很難保證制品中每個(gè)序列都正確無(wú)誤。此外需要說(shuō)明的是：如果待合成序列比較特殊 (例如多個(gè)“G”連續(xù)出現(xiàn)等)，合成收率相對(duì)較低，我們可能會(huì)根據(jù)具體情況加收費(fèi)用；有時(shí)我們也可能無(wú)法合成訂購(gòu)的序列，此時(shí)本公司保留不接受定單的權(quán)利。

干燥制品很穩(wěn)定，-20℃下保存2年沒(méi)問(wèn)題。 溶解后的DNA也請(qǐng)保存于-20℃，最好是分份保存，避免反復(fù)凍融。 溶液中的Oligo DNA在常溫下放置3～4天應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，但最好不要放置一個(gè)星期以上。其壽命與容器、溶劑的滅菌程度有關(guān)。

如果您溶解引物的水PH過(guò)低或污染了菌或核酸酶，會(huì)使引物降解。使用時(shí)沒(méi)有充分解凍混合，液體不均勻也可能會(huì)造成引物加入量不準(zhǔn)確。建議分裝引物，避免反復(fù)凍溶。建議使用10mM Tris pH7.5緩沖液溶解引物，因?yàn)橛行┱麴s水的pH值比較低（pH4-5）, 引物在這種條件下不穩(wěn)定。還有一種可能性是引物沒(méi)有問(wèn)題，而是PCR使用材料特別是模板的質(zhì)量與先前使用的不完全一致。

合成的引物和您的定單序列一致，而不是能否擴(kuò)增出您所需要的產(chǎn)物。

合成Oligo DNA時(shí)，盡量選用高純度級(jí)制品。 避免使用過(guò)長(zhǎng)的Oligo DNA，最好選用小于35 mer的合成DNA制品。 進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)時(shí)，每次克隆都須進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，以保證序列的正確性，然后再進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)，尤其需要注意。

所有的制品純化后都要進(jìn)行脫鹽，脫鹽是使用C18柱進(jìn)行的，偶而會(huì)有微量的樹脂溢出而進(jìn)入制品。樹脂不影響任何反應(yīng)結(jié)果，請(qǐng)稍許離心后取上清使用。

由于一般的PCR用引物的5′ 末端都沒(méi)有磷酸基團(tuán)，因此，擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物的5′ 末端也沒(méi)有磷酸基團(tuán)。當(dāng)克隆于去磷酸化的末端平滑載體時(shí)，無(wú)法克隆進(jìn)去；而當(dāng)克隆于非去磷酸化的末端平滑載體時(shí)，背景會(huì)極高。此時(shí)請(qǐng)對(duì)PCR產(chǎn)物的5′ 端進(jìn)行磷酸 (PO4修飾) 化處理。

PCR反應(yīng)失敗的原因很多，可以從以下幾個(gè)方面考慮。 1. 引物和模板是否配對(duì)，同源性有多大? 2. 引物本身是否有立體結(jié)構(gòu)，或者二條引物之間是否形成高次結(jié)構(gòu)? 3. PCR反應(yīng)用試劑是否能正常工作? 4. PCR儀是否工作正常? 5. PCR反應(yīng)條件是否合適? 如果一切正常，還無(wú)法解決問(wèn)題時(shí)，我們可以免費(fèi)重新合成引物。如果重新合成的引物也無(wú)法解決問(wèn)題時(shí)，請(qǐng)把引物和模板寄送給我們公司，我們可以幫助摸索PCR反應(yīng)條件。

基本不是。當(dāng)今發(fā)展出各色各樣的PCR擴(kuò)增技術(shù)，各色各樣的高溫聚合酶，就是來(lái)解決PCR擴(kuò)增中遇到的擴(kuò)不出，擴(kuò)增效率低的問(wèn)題。如槽式PCR就是擴(kuò)增那些拷貝數(shù)很低的基因片段。 有些重復(fù)片段的擴(kuò)增, GC含量高的片段，非要采用特殊擴(kuò)增手段才能擴(kuò)增出了。 引物擴(kuò)增不出，主要是下列兩種情況比較常見(jiàn)： RT-PCR。請(qǐng)注意，很多基因通過(guò)常規(guī)RT–PCR方法是很難不增出來(lái)的。 RT- PCR成功的關(guān)鍵在于RT的反應(yīng)的RNA質(zhì)量和目標(biāo)基因在特定組織和細(xì)胞中含量。 從基因組中擴(kuò)增。一般情況下，基因在基因組中都是單拷貝，基因組作為模板需要嚴(yán)格控制用量。基因組DNA過(guò)高，會(huì)影響反應(yīng)體系中的Mg和pH。

由于核酸在260 nm附近有強(qiáng)吸收，因此常根據(jù)此性質(zhì)，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定核酸溶液在260 nm的吸光度值，據(jù)此對(duì)核酸進(jìn)行定量，用OD值來(lái)表示。1 OD是指：置于光路長(zhǎng)度為1 cm的比色皿中的DNA/RNA溶液，如果其在260 nm處的吸光度值為1，則稱1 ml該溶液中溶解的DNA/RNA的量為1 OD。1個(gè)OD值的合成DNA/RNA的質(zhì)量約為33 μg。將DNA/RNA溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，使吸光度測(cè)定值與樣品濃度的關(guān)系在直線范圍內(nèi)，再根據(jù)原溶液的總體積與稀釋倍數(shù)計(jì)算該溶液的總OD值。 例如，一個(gè)200 μl的DNA/RNA溶液，如果對(duì)其進(jìn)行6倍稀釋，測(cè)定值為1.0時(shí)，則該溶液的總OD值為：0.2 ml×6×1.0 OD/ml=1.2 OD 。

合成DNA的長(zhǎng)度為6～130個(gè)堿基；合成RNA的長(zhǎng)度為8～35個(gè)堿基。當(dāng)合成的DNA序列較長(zhǎng)時(shí)，由于合成及純化方法的限制,很難保證制品中每個(gè)序列都正確無(wú)誤。此外需要說(shuō)明的是：如果待合成序列比較特殊 (例如多個(gè)“G”連續(xù)出現(xiàn)等)，合成收率相對(duì)較低，我們可能會(huì)根據(jù)具體情況加收費(fèi)用；有時(shí)我們也可能無(wú)法合成訂購(gòu)的序列，此時(shí)本公司保留不接受定單的權(quán)利。

沒(méi)有，5' 和3' 末端均為-OH基。如需要加磷酸基團(tuán)，訂貨時(shí)請(qǐng)?zhí)貏e注明，此時(shí)需收取磷酸化 (PO4修飾) 的費(fèi)用。

干燥制品很穩(wěn)定，-20℃下保存2年沒(méi)問(wèn)題。 溶解后的DNA也請(qǐng)保存于-20℃，最好是分份保存，避免反復(fù)凍融。 溶液中的Oligo DNA在常溫下放置3～4天應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，但最好不要放置一個(gè)星期以上。其壽命與容器、溶劑的滅菌程度有關(guān)。

干燥制品很穩(wěn)定，-20℃下保存2年沒(méi)問(wèn)題。 溶解后的DNA也請(qǐng)保存于-20℃，最好是分份保存，避免反復(fù)凍融。 溶液中的Oligo DNA在常溫下放置3～4天應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，但最好不要放置一個(gè)星期以上。其壽命與容器、溶劑的滅菌程度有關(guān)。