酵母雙雜交
- 核蛋白酵母雙雜交
- 膜蛋白酵母雙雜交
服務(wù)特色
金開(kāi)瑞可提供酵母雜交文庫(kù)構(gòu)建、核酵母雙雜交篩選、膜酵母雙雜交篩選、酵母單/雙雜交驗(yàn)證服務(wù)。
服務(wù)介紹
酵母雙雜交及系統(tǒng)是一種鑒定和檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用的研究方法，因其具有靈敏性高、功能強(qiáng)大、適用范圍廣等特點(diǎn)，現(xiàn)已被應(yīng)用于多個(gè)研究領(lǐng)域。
核蛋白酵母雙雜交：
核蛋白酵母雙雜交技術(shù)最初由Fields等人在研究酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4性質(zhì)時(shí)建立，后續(xù)經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)已發(fā)展成為一種成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有簡(jiǎn)便、靈敏、可反映蛋白在活細(xì)胞內(nèi)互作真實(shí)情況的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗(yàn)證、蛋白互作機(jī)理的探究、蛋白連鎖圖譜繪制等工作。
膜蛋白酵母雙雜交：
DUALmembrane技術(shù)在傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，巧妙地利用分離的泛素系統(tǒng)(split-ubiquitin) 進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的篩選；泛素作為降解信號(hào)分子，人為分成兩部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)，互補(bǔ)重構(gòu)的完整泛素分子可被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識(shí)別，從而導(dǎo)致與泛素相連的蛋白被酶解。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 一站式輔助檢測(cè)手段方便快捷，得到可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)論；
- 多年文庫(kù)構(gòu)建經(jīng)驗(yàn)，4種優(yōu)化的Total RNA提取技術(shù)方案可以有效保證Total RNA的純度和完整性，保證樣本的多樣性。
- 直接檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用，而不依賴于其他分子或細(xì)胞的參與；
- 可同時(shí)篩選和鑒定多個(gè)蛋白質(zhì)間的相互作用，實(shí)現(xiàn)高通量的篩選和分析；
- 采用多個(gè)篩選步驟，如報(bào)告基因的驗(yàn)證和酵母菌株的雙重選擇，可以減少非特異性相互作用的假陽(yáng)性結(jié)果；
- 可通過(guò)報(bào)告基因的表達(dá)水平定量評(píng)估蛋白質(zhì)相互作用的強(qiáng)度，進(jìn)一步了解相互作用的動(dòng)力學(xué)和功能。
服務(wù)說(shuō)明
服務(wù)流程
酵?雜交?庫(kù)構(gòu)建：
酵母單雜交文庫(kù)篩選
酵母雜交驗(yàn)證：
| 服務(wù)項(xiàng)目 | 應(yīng)用 | 互補(bǔ)實(shí)驗(yàn) |
| 酵?雜交?庫(kù)構(gòu)建 | 酵?雜交篩選 | / |
| 核酵?雙雜交篩選 | 獲得與已知蛋?互作的未知蛋? | COIP，GST pulldown |
| 膜酵?雙雜交篩選 | 研究膜蛋?之間的互作 | COIP，GST pulldown |
| 酵?單/雙雜交驗(yàn)證 | 已知蛋?與蛋?/啟動(dòng)?之間的互作 | EMSA，雙熒光素酶，COIP，GST pulldown |
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服務(wù)項(xiàng)目 |
客戶提供 | 最終交付 |
| 文庫(kù)構(gòu)建 |
組織/細(xì)胞 |
滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文庫(kù)菌液；文庫(kù)PCR鑒定結(jié)果圖片(陽(yáng)性率在90%左右) |
| 文庫(kù)篩選 |
蛋白序列/基因序列/質(zhì)粒 |
篩選過(guò)程中的全部原始圖片；篩選獲得所有相互作用的獵物蛋白的測(cè)序結(jié)果 |
案例展示
相關(guān)技術(shù)服務(wù)
| ? 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng) | ? CO-IP | ? EMSA |
| ? RNA pull-down | ? RIP-qPCR | ? DNA pull-down |
| ? ChIP-qPCR | ? 酵母單雜交 | ? CUT&Tag |
相關(guān)資源
一、酵母雙雜交技術(shù)與其他實(shí)驗(yàn)方法結(jié)合使用，進(jìn)一步驗(yàn)證和深入研究相互作用的結(jié)果。以下是一些常見(jiàn)的與酵母雙雜交技術(shù)結(jié)合使用的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)：
● 共沉淀實(shí)驗(yàn)（Co-immunoprecipitation）：通過(guò)共沉淀實(shí)驗(yàn)可以驗(yàn)證在酵母雙雜交中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)相互作用是否在真實(shí)生物環(huán)境中發(fā)生。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)特定抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，并隨后使用免疫沉淀技術(shù)將與其相互作用的蛋白質(zhì)一起沉淀下來(lái)，以進(jìn)一步證實(shí)相互作用的存在。
● 免疫熒光染色（Immunofluorescence Staining）：通過(guò)免疫熒光染色可以確定蛋白質(zhì)相互作用的亞細(xì)胞定位和動(dòng)態(tài)變化。該技術(shù)使用特定抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，并通過(guò)熒光標(biāo)記的二抗或熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)結(jié)合域來(lái)可視化相互作用的位置和形式。
● 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）：ELISA可以定量測(cè)定蛋白質(zhì)之間的相互作用強(qiáng)度。通過(guò)將酵母細(xì)胞裂解提取的蛋白質(zhì)與特定抗體結(jié)合，再用標(biāo)記的二抗和酶底物進(jìn)行檢測(cè)，可以測(cè)定相互作用的強(qiáng)度。
● 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析技術(shù)：例如X射線晶體學(xué)和核磁共振等技術(shù)，可以用于解析蛋白質(zhì)相互作用的三維結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步了解相互作用的機(jī)制和結(jié)構(gòu)特征。
● 蛋白質(zhì)組學(xué)分析：通過(guò)質(zhì)譜技術(shù)（如質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)）可以鑒定和定量測(cè)定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)。這種方法可以提供更全面的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)信息。
● 基因表達(dá)分析：通過(guò)基因表達(dá)分析方法（如實(shí)時(shí)定量PCR、RNA測(cè)序等），可以確定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的基因的表達(dá)水平的變化。這有助于了解蛋白質(zhì)相互作用對(duì)基因調(diào)控的影響。
● 細(xì)胞熒光共定位分析：通過(guò)將熒光蛋白標(biāo)記的蛋白質(zhì)與目標(biāo)蛋白質(zhì)共表達(dá)，通過(guò)熒光顯微鏡觀察它們?cè)诩?xì)胞中的共定位情況，可以進(jìn)一步證實(shí)它們的相互作用。
● 組織特異性表達(dá)分析：通過(guò)組織特異性表達(dá)分析方法（如原位雜交、免疫組化等），可以確定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的基因在不同組織中的表達(dá)模式，從而了解蛋白質(zhì)相互作用的組織特異性。
● 代謝標(biāo)記技術(shù)：通過(guò)代謝標(biāo)記技術(shù)（如蛋白質(zhì)生物素標(biāo)記、蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記等），可以跟蹤和定量測(cè)定蛋白質(zhì)相互作用的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化。
二、研究蛋白質(zhì)之間相互作用的方法簡(jiǎn)介、應(yīng)用場(chǎng)景、優(yōu)劣勢(shì)及優(yōu)化建議
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方法 |
簡(jiǎn)介 |
應(yīng)用場(chǎng)景 |
優(yōu)劣勢(shì) |
優(yōu)化建議 |
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酵母雙雜交 （Yeast Two-Hybrid） |
利用酵母細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄激活和檢測(cè)系統(tǒng)， 篩選和鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用 |
揭示蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)、調(diào)控機(jī)制、代謝途徑等生物過(guò)程 |
優(yōu)勢(shì)：高通量篩選、生理相關(guān)性、定量分析能力； 限制：非自然環(huán)境、假陰性結(jié)果 |
選擇適當(dāng)?shù)恼T餌和獵物構(gòu)建策略，優(yōu)化培養(yǎng)條件， 使用高靈敏性檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證， 增加篩選步驟和互補(bǔ)技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。 |
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（Co-immunoprecipitation） |
利用特異性抗體富集目標(biāo)蛋白質(zhì)及其結(jié)合的互作伙伴 | 研究蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成、結(jié)構(gòu)和功能 |
優(yōu)勢(shì)：生物相關(guān)性、較低的假陽(yáng)性率、定性和定量分析能力； 限制：特異性抗體的選擇、技術(shù)復(fù)雜性 |
選擇合適的抗體，進(jìn)行前處理步驟以減少非特異性結(jié)合， 使用對(duì)照實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果，結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)行互補(bǔ)驗(yàn)證。 |
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表面等離子體共振 （Surface Plasmon Resonance，SPR） |
監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)合到傳感芯片表面的光學(xué)信號(hào)變化 | 評(píng)估蛋白質(zhì)結(jié)合的動(dòng)力學(xué)、親和力和特異性 |
優(yōu)勢(shì)：高靈敏度、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)； 限制：設(shè)備和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的要求 |
選擇適當(dāng)?shù)膫鞲行酒徒Y(jié)合條件，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)參數(shù)和流速， 增加對(duì)照實(shí)驗(yàn)和質(zhì)控步驟，優(yōu)化數(shù)據(jù)分析和解釋。 |
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核磁共振 （Nuclear Magnetic Resonance，NMR） |
通過(guò)測(cè)量核磁共振譜來(lái)研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和相互作用 | 研究蛋白質(zhì)的折疊狀態(tài)、結(jié)合界面和動(dòng)態(tài)變化 |
優(yōu)勢(shì)：高分辨率、提供結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)信息； 限制：設(shè)備和技術(shù)要求、樣品的制備和穩(wěn)定性 |
選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)記方式和溶劑條件，優(yōu)化樣品純度和濃度， 選擇適當(dāng)?shù)腘MR實(shí)驗(yàn)方案，優(yōu)化數(shù)據(jù)采集和處理以提高信噪比。 |
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光學(xué)顯微技術(shù) （Fluorescence Microscopy） |
觀察蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布和相互作用 | 研究蛋白質(zhì)相互作用的時(shí)空動(dòng)態(tài)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)控機(jī)制 |
優(yōu)勢(shì)：實(shí)時(shí)觀察、非侵入性； 限制：需標(biāo)記蛋白質(zhì)、分辨率和深度的限制 |
選擇合適的標(biāo)記方法和探針，優(yōu)化成像條件和細(xì)胞處理步驟， 使用高分辨率成像系統(tǒng)和圖像分析軟件進(jìn)行定量和定性分析。 |
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GST pull-down |
利用GST-融合蛋白將目標(biāo)蛋白質(zhì)及其結(jié)合的互作伙伴富集， 通過(guò)親和純化和檢測(cè)來(lái)分析相互作用 |
鑒定蛋白質(zhì)相互作用、篩選結(jié)合伙伴、研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能 |
優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)單易行、高純度富集、適用于大規(guī)模篩選； 限制：需蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化、可能存在非特異性結(jié)合和假陽(yáng)性 |
優(yōu)化選擇合適的GST標(biāo)簽和親和純化條件， 進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)和負(fù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)， 結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)行互補(bǔ)驗(yàn)證， 使用高靈敏性檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。 |
三、酵母雙雜交技術(shù)適用于多個(gè)研究領(lǐng)域，包括但不限于以下方面：
● 蛋白質(zhì)相互作用研究：酵母雙雜交技術(shù)廣泛應(yīng)用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)識(shí)別和驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系，可以揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成和結(jié)構(gòu)，從而深入了解細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、代謝途徑等生物過(guò)程。
● 蛋白質(zhì)功能研究：通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)，可以研究蛋白質(zhì)的功能和調(diào)控機(jī)制。例如，通過(guò)識(shí)別蛋白質(zhì)與轉(zhuǎn)錄因子、核酸結(jié)合蛋白等的相互作用，可以了解蛋白質(zhì)在基因調(diào)控中的作用，以及調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建立和維持。
● 藥物研發(fā)：酵母雙雜交技術(shù)可應(yīng)用于藥物研發(fā)領(lǐng)域。通過(guò)篩選藥物分子與靶蛋白之間的相互作用，可以評(píng)估藥物的潛在效果和副作用，優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)，加速藥物發(fā)現(xiàn)過(guò)程。
● 疾病研究：酵母雙雜交技術(shù)可用于研究與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)相互作用。通過(guò)篩選與疾病相關(guān)基因的相互作用蛋白質(zhì)，可以揭示疾病的發(fā)生機(jī)制，尋找潛在的治療靶點(diǎn)。
● 進(jìn)化生物學(xué)研究：酵母雙雜交技術(shù)可以用于研究物種間的蛋白質(zhì)相互作用。通過(guò)比較不同物種中的相互作用網(wǎng)絡(luò)，可以了解蛋白質(zhì)相互作用的進(jìn)化變化，探究物種適應(yīng)性和進(jìn)化的基礎(chǔ)。
總而言之，酵母雙雜交技術(shù)在多個(gè)研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。它為研究蛋白質(zhì)相互作用、揭示蛋白質(zhì)功能和調(diào)控機(jī)制、藥物研發(fā)和疾病研究等提供了有力的實(shí)驗(yàn)工具和方法。
