染色體免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用來研究蛋白質與DNA是否在體內存在相互作用,這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。利用抗體抗原特異性結合,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來，能夠真實地反映結合在DNA序列上的調控蛋白。

• 快速樣本處理：采用優化的裂解緩沖液，顯著縮短染色質片段化時間（30分鐘內完成），避免傳統方法過長的耗時問題。

• 多物種兼容：支持人類、小鼠、大鼠、植物等樣本，適用細胞系、組織、冷凍樣本等多種類型。

• 小規格包裝：避免試劑浪費，尤其適合經費有限的實驗室

• 蛋白質-DNA相互作用研究

• 組蛋白修飾分析

• 轉錄因子結合位點定位

• 表觀遺傳學研究

• 疾病機制研究和基因表達調控

Q1:怎么探索超聲條件

1)接觸式超聲儀:取2mLEP管,加入1.4mL液體,將探頭置于EP管中心,液面下約一半的位置,設置 超聲時間為10S,逐漸增加功率,直至開始起泡,此時功率為超聲最大功率。在此基礎上設置三個不同的功率梯度和時間梯度進行探索。

2)非接觸式:可按廠家推薦進行探索。

Q2:超聲后片段不符合要求

1)有符合要求的片段也有比較集中無法超聲的大片段,可能是交聯溫度過高,交聯時始終保持溫度 低于25℃,尤其是夏天溫度較高可將試劑和樣本放置空調出風口一段時間再進行操作。

2) 片段很集中且小于200bp,超聲功率和時間不合適,需要做預實驗探索最佳超聲條件。

Q3:IP和IgG樣本Ct值沒有差異

1)抗體沒有富集到DNA,可更換抗體嘗試。

2)IgG背景過高,可增加洗滌次數或減少免疫沉淀步驟DNA投入量。

3)結合位點預測錯誤,需重新設計引物。

Q4:溶解曲線異常

溶解曲線非單一峰,可能為非特異擴增或有引物二聚體等情況,需重新設計引物。

Q5:樣本DNA濃度很低,低于10ng/μL

1)樣本投入量過少:考慮增加樣本初始投入量,尤其是肌肉,心臟等。

2)裂解不完全:樣本過度交聯或研磨不充分。

3)如遇難裂解樣本可在加入LysisBuffer后-80°C急速冷凍,37℃解凍,反復凍融3次。

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