siRNA合成（三保一）
- 專業算法優化三條序列
- 批次高一致性
- 最小化脫靶風險
服務特色
金開瑞配備了先進齊全的實驗設備，涵蓋各種規格的全自動合成儀以及尖端的純化系統。依托多年成熟的siRNA合成經驗，公司已成功構建并完善了一整套高效、精準的siRNA合成及純化技術體系。這一體系確保了金開瑞能夠穩定地提供高純度、高活性的siRNA產品，為科研工作者提供可靠的實驗材料。
服務介紹
小干擾RNA（siRNA）是一種人工設計的短雙鏈RNA分子，是RNA干擾（RNAi）技術中的核心工具，能夠特異性地降解靶標信使RNA（mRNA），從而實現基因沉默。目前，化學合成法是最常用且高效的siRNA制備方式，它通過固相合成技術精確地合成所需序列的RNA單鏈，再退火形成雙鏈siRNA。這種方法能快速提供高純度的定制化siRNA，為研究基因功能、藥物靶點篩選及開發新型療法提供了關鍵材料。
本公司?產的siRNA均為常規化學?法合成21-25nt的雙鏈?RNA。經HPLC純化，可直接?于細胞轉染使?。產品劑型為凍?粉，產品劑量經過嚴格測算，以摩爾數標明。
服務優勢
- 獨家專利技術設計siRNA，在保證細胞轉染效率（≥80%）的前提下，siRNA可達到70%以上的沉默效果；
- 售后：若經qRT-PCR鑒定，套餐中3對siRNA均未達到70%或以上的沉默效果，如核實為siRNA設計問題，則重新設計并免費合成針對靶基因的另外3對siRNA。特殊物種（除人，大鼠，小鼠以外）及lncRNA除外。
服務流程
客戶提供
準確地提供 siRNA 的 19 個核苷酸的靶序列和懸垂的合成物或者需要設計的基因名稱和基因序列及要求，（如果是做三保一，需要交由金開瑞設計，客戶提供的序列不做保證型套餐）。
最終交付
- siRNA 三條各2管（1OD/管，合計2OD），3個對照各1管（1OD），1管DEPC水（1mL），合計10管；
- 訂單基因信息文件；
- 檢測報告；
- siRNA使用說明書。
服務說明
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siRNA三保一套餐內容 |
規格 | 純化方式 |
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目的基因siRNA oligos |
3對(3×2 OD) | HPLC |
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陰性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
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FAM標記陰性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
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陽性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
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DEPC水 |
1mL | / |
常見問題與解析 (Q&A)
已經有為數不少的實驗室研究過熒光標記的 siRNA 的熒光檢測結果和 knockdown 效率之間的正相關關系。熒光標記雙鏈是最常用的優化轉染條件的方法。可以用流式細胞儀或者熒光共聚焦顯微鏡檢測標記的 siRNA。
使用什么樣的轉染方法，很大程度上取決于您使用的細胞系： 1.貼壁的、易轉染的細胞，我們推薦 使用 Lipofectamin 2000 或 siRNA Mate 轉染試劑。 2.懸浮的或原代的細胞，我們推薦使用電擊轉化方法；3.電擊轉化效率仍然很低的細胞，需要選擇載體系統。
最常見的影響沉默效果的兩個原因是：轉染效率低和 siRNA 序列設計的效果不理想。如果您初次使用 siRNA 或采用了新的細胞系，并發現沉默效果不佳，我們建議您對轉染效率進行檢測，并選擇優化轉染條件。如果您已經對實驗轉染條件進行優化但是問題依然存在，我們建議您換用另一種轉染試劑或是采用其他技術，這也許能提高轉染效率。如果已經提高了轉染效率但是沉默效果仍然未達到要求，可能是因為siRNA序列設計的效果不理想。
1. 無論您用什么轉染試劑，轉染時盡量不要加血清，血清里面的小分子會與siRNA競爭性進入細胞，會影響轉染效率，也有說血清里含有RNA酶，會將siRNA給降解掉。 2. 轉染后一般推薦8-12h換液，這時可以加血清與正常培養細胞一樣。 3. 轉染前應根據細胞種類、生長速度等因素決定轉染時的細胞密度。推薦細胞密度在60%-80%時進行轉染實驗。 細胞密度過低將影響檢測結果。siRNA會隨著細胞增殖降低在細胞內的濃度。例如：轉染時細胞密度50%，轉染效率達到100%，siRNA的有效率也100%，36h后細胞長滿平皿進行檢測。最后提的是總RNA沉默效率可能只有50-60%。細胞密度過大，如超過90%，也會影響轉染效率且后期細胞會由于密度過大生長情況受到影響無法得到理想實驗結果。
